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抗体真的是偶联上磁性荧光编码微球的吗?

  • 发布日期:2024-04-18      浏览次数:102
    • 在荧光编码微球的偶联方法中,可以用氨基和羧基的共价偶联方式,也可以用亲和素和生物素的偶联方式,但还有一种让抗体连到微球上的方式经常被忽略了,那就是无处不在的物理吸附。

      流式荧光编码微球通常为含有氧化铁纳米粒子的聚苯乙烯微球,表面为各种功能团修饰。长期以来有一个容易忽略的问题,那就是聚苯乙烯表面是疏水的,这种疏水的表面在生理水溶液条件下,能通过疏水相互作用与抗体/抗原等发生物理结合。所以我们在将蛋白偶联到微球的时候,即使我们采用是某种特定的偶联方式,但实际上这个物理吸附作用是不可避免的。而事实上,这种物理吸附的方式也是常用的在表面固定生物大分子的一种方式,如著名的JSR公司提供的表面疏水的磁性微球就可以直接通过物理吸附结合抗体。

      回到流式荧光法的磁性荧光编码微球连接蛋白,这种吸附作用会带来什么影响?我们仔细分析一下,物理吸附是一种不太牢固的固定方式,由总体上较弱的分子间作用力(范德华力)而产生的。它是一个动态的平衡过程,有一部分吸上去,也会有一部分释放出来。这对于单因子检测(流式荧光法应该没太多人会用来测单因子),影响应该不大,不管吸附上的还是释放出来都是它。但是对于联合检测,这种不固定的动态平衡则会导致本该特异性结合的抗原/抗体释放出来,然后被其它不对应的磁性荧光编码微球吸附上去,最终会对检测的特异性和准确性造成很大的干扰。

      综上所述,在选择微球时,信号值高是一个很重要的参数,但需要思考的是这种高荧光值到底是通过物理吸附还是来自于偶联的信号,而这些物理吸附会不会影响联合检测中的特异性和准确性。