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流式荧光技术又称悬浮阵列或液相芯片,是近年来新兴起的多指标联合检测技术,其不仅拥有化学发光高灵敏度、高精密度的优势,同时具备高通量、高速度、多重指标联检等优势,克服了化学发光一次只能检测一项指标的不足,能够满足日益增长的临床检测需求,有望与化学发光形成互补,甚至替代化学发光。流式荧光技术已被逐渐地应用到临床检验、遗传分析、药物开发、生物医学、药物基因,以及生物战的细菌检测等。但是目前国内的高通量流式荧光检测微球以进口为主,自主研发尚处于早期阶段。
目前流式荧光术在国内主要用于细胞因子的检测。细胞因子检测是判断机体免疫功能的一个重要指标,因而具有重要的研究价值,同时在临床上有诸多实用价值,对于许多疾病的诊断、病程观察、疗效判断及细胞因子治疗检测都有重要的意义。在判断机体免疫功能时,通常我们需要知道机体多个细胞因子的水平。而流式荧光技术的发明就像为检测多个细胞因子指标量身定做的一样,完满迎合了这种需要同时了解多个指标的信息的需求。因此,目前国内基于流式荧光术的细胞因子检测迅速成为体外诊断的热点之一,近两年相关产品不断涌现。然而,受制于荧光编码微球的制备技术,国内市场上的细胞因子试剂产品绝大一部分都是国内厂商通过进口原料分装进行生产的。而国际上能够提供细胞因子检测试剂的主要生产商分别是美国的BD、Biolegend、AimPlex。这些厂家提供的试剂,微球不具有磁性,不利于发展相关的自动化仪器。此外,这些商家的微球采用单荧光标记,同时检测的指标数量有限,即使采用两种不同粒径的微球搭配,也只能同时检测10多种细胞因子。
此外,尽管流式荧光术能同时检测多种细胞因子,但由于正常人的血清中细胞因子浓度较低,在实际检测中,目前大部分试剂对正常人血清中各细胞因子的检出率不高,一些血清样本的荧光值甚至低于对照品浓度为0时的荧光值,结果的准确性不高。究其原因,主要是荧光编码微球对荧光检测抗体的非特异吸附较强,导致噪音较高(噪音为对照品为0时的检测荧光值-微球本底检测荧光值)。当检测低值血清样本中,血清中存在复杂的蛋白质体系,不可避免这些蛋白质同样会与微球产生非特异性吸附,从而与荧光检测抗体竞争非特异性吸附位点,使最终的荧光检测值下降。因此减少荧光编码微球对荧光检测抗体的非特异性吸附可显著提升低值血清样本检测的准确性。
碧芯生物科技(海南省)有限公司通过不断摸索和优化实验条件,通过合成特殊的粒径不同的微球,再用Avidin修饰微球表面,最终构建了约60种低吸附的荧光编码微球。与普通的荧光编码微球相比,这些被特殊的微球具有对蛋白质低非特异性吸附的特点。因此,用这种包裹好的荧光编码微球构建的抗原检测试剂的噪音值明显降低,可显著提升灵敏度及低值血清样本的检出率
指标名称 | 碧芯生物Beadstar-mPlex 检出率 | 某进口品牌细胞因子检出率 |
IL-2 | 20/20 (100%) | 15/20 (75%) |
IL-4 | 12/20 (60%) | 4/20 (20%) |
IL-6 | 18/20 (90%) | 10/20 (50%) |
IL-10 | 20/20 (100%) | 4/20 (20%) |
IL-17A | 11/20 (55%) | 9/20 (45%) |
TNF-α | 18/20 (90%) | 4/20 (20%) |
IFN-γ | 17/20 (85%) | 3/20 (15%) |
18189751352